几丁质酶测试盒

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几丁质酶测试盒测定意义：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理：

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与DNS试剂反应产生棕红色化合物，在540nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。自备实验用品及仪器

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(土壤样品专用)和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃避光保存。临用前加入667μL无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入9.333 mL蒸馏水混匀，避光保存。

试剂四：粉剂×1管，4℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水，充分溶解。

标准品：粉剂×1瓶，临用前加10 mL蒸馏水，充分溶解。1μmol/mL标准液，4℃避光保存。

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到570 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸馏水，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A空白管。显色后务必在30min内测完。

3. 标准管：取EP管，加入10μL标准品，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A标准管。显色后务必在30min内测完。

4. 测定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A测定管。显色后务必在30min内测完。

注意：空白管和标准管只需要测定一次。

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