简要描述:
pHyVec4质粒是使用广泛的基因操作工具,可以进行编码基因、microRNA、lncRNA的功能研究、启动子活性、转录因子及3’UTR调控研究等。
更新时间:2024-09-03;厂商性质:经销商;览量:1950
质粒名称:pHyVec4
质粒规格:2ug
实验步骤:
1)质粒提取
1.10,0001min离心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中
2.加入100溶液1,振荡至*悬浮
3.加入200溶液2,立即轻柔颠側离心管6次,使菌体充分裂解,随后将离心管冰上放置
3分钟
4.加入150山溶液3,立即温和颠倒离心管数次,冰上放置3分钟,10,00g离心10mins
5.将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质),加入等体积的苯酚/氖仿/异成醇混
合均匀10,000离心5min
将步骤5的上清转移至新的离心管,加入2倍体积的无水乙醇,室温放置5-1omin,沉
降DNA
7.10000g离心10分钟,弃乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗涤沉淀,10,000离
心5分钟
8.倒掉乙醇溶液,用吸水纸吸净管壁上的水珠,室温蒸发痕量乙醇
9.加入适量含 Rnase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA
2)质粒鉴定琼脂糖礙胶电泳
灌胶:胶中加入芡光染料< SYBR Green)
加样:质粒+上样緩冲液→混匀
电泳
结果观察:UV灯下
pHyVec4实验分析:
裂解细胞中除含有质粒DNA外,还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质,因
用碱裂解法除去杂质
1、防止DNA裂解: Solution1
1)、所含糖增加溶洨黏度,維持渗透压,防止DNA受机械剪切作用降解
2)、所含EDTA抑制酶活性
2、溶解与变性: Solution2
1)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性
100370-200301 泛酸钙 HPLC法含量测定 50mg
100371-200802 乌苯美司 含量测定 100mg
100373-200502 阿苯达唑 含量测定 100mg
100374-200903 苯磺酸氨氯地平 含量测定 100mg
100375-200502 盐酸特拉唑嗪 含量测定 100mg
100376-201001 氯化钠 含量测定 100mg
100379-200501 氨力农 UV法含量测定 100mg
100380-200301 更昔洛韦 含量测定 50mg
100381-200301 肾上腺色腙 检查用 50mg
100382-200301 紫杉醇 含量测定 30mg
100384-200501 大蒜素 含量测定 0.5ml
100385-200401 豆腐果苷 HPLC法含量测定 100mg
100386-200702 吡拉西坦 含量测定 100mg
100387-200401 呋咱甲氢龙(夫拉扎勃) 含量测定 50mg
100388-200401 *泊苷 含量测定 100mg